Technologie de production et de sélection de Flammulina velutipes

Flammulina velutipes est un légume à très haute valeur nutritionnelle, je vais donc vous parler aujourd'hui de la technologie de production et de sélection de Flammulina velutipes :

1. Achat de souches de Flammulina velutipes et des principales installations et équipements de production

1.1 Installations principales. La taille de la salle d’inoculation, de la salle de culture, de la salle d’opération et de la salle de stockage dépend de l’échelle de production.

1.2 Équipement principal. Banc propre (ou boîte d'inoculation), boîte à température constante, table d'opération, chaise pivotante, stérilisateur haute pression, stérilisateur à pression normale, pot en acier, balance, balance de table, éprouvette graduée, bouteille en verre, tube à essai, etc.

1.3 Sélection des souches bactériennes. Choisissez et achetez d’excellentes variétés de haute qualité, à haut rendement, résistantes au stress, stables dans leurs caractéristiques, à croissance rapide, d’une grande pureté, exemptes de bactéries étrangères et exemptes de maladies et de parasites.

2. Sélection et production du milieu de culture pour chaque souche

2.1 Préparation du milieu incliné de la culture mère :

Recette : ① 200-250 g de pommes de terre, 20 g d'agar, 20 g de sucre, 1000 ml d'eau, pH ajusté à 6,5. ②200-250 grammes de pommes de terre, 20 grammes d'agar, 20 grammes de glucose, 1000 millilitres d'eau et ajustez le pH à 6,5. ③ 200-250 grammes de pommes de terre, 5 grammes de sulfate de magnésium, 20 grammes de sucre, 100 millilitres de vitamine B1 (B2), 2,50 grammes de dihydrogénophosphate de potassium, 20 grammes d'agar, 1000 millilitres d'eau et ajuster le pH à 6,5.

Préparation : Couper les pommes de terre en rondelles et les faire bouillir dans une marmite en acier pendant 30 minutes. Utiliser quatre couches de gaze pour filtrer le jus, ajouter l'agar-agar et les autres ingrédients, remuer pour dissoudre, puis ajouter le sucre, ajouter de l'eau jusqu'à 1000 ml et transférer dans un tube à essai de culture d'une capacité de 1/5 de la longueur du tube.

2.2 Préparation du milieu de culture pour les espèces d'origine et les espèces cultivées :

Formule ① Milieu de culture de sciure : 73 % de copeaux d'arbres à feuilles larges, 1 % de saccharose, 2,50 % de son de riz fin (ou de son de blé), 1 % de carbonate de calcium, rapport eau/matière 1:1,20-1,30.

② Milieu de culture de coques de graines de coton : coques de graines de coton 88 %, saccharose 1 %, sucre fin (ou son de blé) 10 %, carbonate de calcium 10 %, le rapport eau/matière est le même que ①.

③Milieu de culture des grains de blé : grains de blé (ou grains de maïs sont également acceptables) 99 % carbonate de calcium 1 %, rapport eau/matière 1:1,20.

Préparation : Peser les différents ingrédients selon les proportions ci-dessus et les mélanger. Dissolvez le sucre et les produits chimiques dans l’eau, ajoutez-les au matériau et mélangez bien, puis notez la quantité d’eau utilisée pour la dissolution dans le rapport eau/matériau. Les coques de graines de coton doivent être mélangées à de l'eau pour les préhumidifier avant de les mélanger ; les grains de blé doivent être trempés avant d'être mélangés, puis cuits dans une casserole jusqu'à ce que les grains de blé ne soient pas cassés. Sortez-les et séchez-les avant de les mélanger avec d'autres matériaux. Une fois tous les matériaux mélangés, ils sont mis en bouteille, la quantité de remplissage étant de 1/3 de la capacité de la bouteille.

3. Préparation de la souche liquide

Recette : ① 3 % de glucose, 1 % de farine de maïs, 2 % de farine de soja, 0,20 % de carbonate de calcium, 0,10 % de phosphate dipotassique, 0,50 % de levure en poudre, 0,05 % de sulfate de magnésium. Dissoudre chaque ingrédient dans de l'eau et bien mélanger pour obtenir une suspension. Faire bouillir pendant 30 minutes, prélever le surnageant et le dissoudre, puis le mettre dans une fiole conique de 500 ml contenant 10 petites billes de verre.

Formule ② 20 % de pommes de terre, 0,20 % de protéines, 20 % de glucose, 0,05 % de phosphate dipotassique, 0,05 % de sulfate de magnésium, 0,01 % de chlorure de potassium. Extraire le filtrat des pommes de terre de manière conventionnelle, ajouter les autres ingrédients, puis fixer la solution et la mettre dans le flacon.

Recette ③ : 5 % de farine de maïs, 0,50 % de levure en poudre, 4 % de saccharose, 0,20 % de carbonate de calcium, VB1 mg. La méthode de préparation est la même que la recette ①.

3.1 Stérilisation du milieu de culture et désinfection des installations et du matériel

3.2 Milieu incliné de culture mère. Pour la stérilisation à haute pression du milieu de culture liquide, utiliser 1,10 kg par mille centimètres et stériliser à 121 °C pendant 30 minutes. Pour le milieu de culture bactérien solide, le placer immédiatement sur une pente après la stérilisation, et la longueur de la pente doit être égale à la moitié de la longueur du tube à essai.

3.3 Milieu de culture pour les espèces mères et les cultivars. Autoclaver avec une pression de 1,50 kg par mille centimètres et stériliser à 121°C pendant 1 heure. Pour les milieux de culture contenant des grains de blé comme matières premières, le temps de stérilisation doit être prolongé de manière appropriée. Il peut également être stérilisé à la vapeur sous pression normale, c'est-à-dire stérilisé à 100°C pendant 8 heures.

3.4 Désinfection des installations. La salle d'inoculation, la salle de culture et la salle d'opération peuvent être fumigées avec du formol chauffé ou brûlées avec de la poudre de soufre. La dose est de 10 ml de formol par mètre cube d'espace et de 15 grammes de poudre de soufre par mètre cube d'espace. Utiliser une solution aqueuse d'hypochlorite de calcium (20 à 40 grammes par mille mètres) et de 2 à 3 % de Lysol pour pulvériser le sol et les murs.

3.5 Désinfection du matériel. Le banc propre et ses différents outils doivent être trempés et frottés avec de l'alcool à 70 % ou de l'acide phénique à 5 % et de la chlorhexidine à 0,25 %. Avant l’inoculation, allumez la lampe UV pour la stérilisation pendant 15 minutes.

4. Inoculation et culture de bactéries

4.1 Inoculation et culture des souches mères. Lors de l'inoculation, le tube à essai (goulot de la bouteille) est orienté vers le bas et proche de la flamme de la lampe à alcool. Utilisez une aiguille d'inoculation pour couper le mycélium du tube à essai mère avec le milieu de culture d'origine en petits morceaux de 0,50 cm x 0,50 cm. Déplacez-les dans la pente d'un nouveau milieu de culture en tube à essai, bouchez-les hermétiquement avec du coton et placez-les dans une boîte à température constante de 23 °C ou dans une salle de culture pendant 8 à 10 jours jusqu'à ce que le mycélium recouvre toute la pente.

4.2 Inoculation et culture des espèces originelles et des espèces cultivées. À l'aide d'une aiguille d'inoculation, prélevez un bloc de mycélium d'un centimètre carré dans le tube à essai mère et inoculez-le dans le milieu de culture du flacon contenant les semences d'origine (ou les semences cultivées). De même, l'embouchure du flacon doit être proche de la flamme de la lampe à alcool et la vitesse doit être rapide. Après la connexion, remplissez-le de coton et placez-le dans une salle de culture à 23℃ pour la culture.

4.3 Inoculation et culture de souches liquides : Inoculer un morceau de 2 cm2 de souche mère inclinée à croissance vigoureuse dans le milieu de culture liquide après stérilisation à haute pression, de sorte que le côté du mycélium en suspension dans la vapeur soit suspendu à la surface du liquide vers le haut, et le cultiver statiquement à 23 °C pendant 2 à 3 jours, puis le placer sur une machine à agiter les bouteilles composées (fréquence d'oscillation 80 à 100 fois/minute) pour une culture par agitation pendant 3 à 4 jours. Lorsque le liquide est jaune clair, clair et transparent, et qu'il a un parfum, le déplacer dans la salle d'inoculation désinfectée, verser le liquide sur la surface du milieu de culture désinfecté à l'embouchure de la flamme de la lampe à alcool, la quantité est de 10 à 15 ml par bouteille, puis le placer dans une salle de culture à 23 °C pendant environ 27 jours avant de pouvoir l'utiliser comme variété de culture. La particularité des souches liquides est qu'elles peuvent être utilisées comme souches mères lorsque la quantité de souches mères est faible. La culture en milieu de culture liquide ne prend qu'environ une semaine, ce qui est quatre fois plus court que la culture de souches mères solides. De plus, l'âge des souches est constant, le mycélium est sain et la vitalité est vigoureuse.

5. Conservation des souches de Flammulina velutipes

5.1 Stockage à basse température. Placez les bactéries qui ont poussé sur la pente dans un réfrigérateur à 4°C et repiquez-les une fois tous les 5 mois.

5.2 Conserver à température ambiante. Une fois que le milieu de culture préparé avec de la sciure de bois est entièrement développé avec du mycélium, il est scellé avec de la paraffine et des bouchons de coton et stocké à température ambiante.

5.3 Stockage d'azote liquide. Les souches sont stockées dans des réservoirs d'azote liquide à -130-- -193℃.